四、试验步骤
1、果蝇培育基的制备
(1) 培养瓶的洗涤:
在超声清洗器中参加少许洗涤剂,将培养瓶放入其中超声清洗约30min,取出培养瓶用净水将洗涤剂冲刷清洁,然后倒放晾干或于培养箱中烘干。
(2) 培养瓶的灭菌:
果蝇的培养基要装在经过灭菌处置的培养瓶中。灭菌可防止真菌污染,也可杀逝世培养瓶中可能残留的幼虫或蛹,防止混淆。
灭菌的方式是:将带塞的培养瓶在高压蒸气灭菌锅中,121˚C条件下灭菌15~20min。
(3) 培养基的配制:
表1.4 果蝇培养基配方
水 1L
玉米粉 105g
蔗糖 75g
琼脂 7.5g
丙酸 6.25ml
酵母粉 20g
量取1L水,将大约一半倒入一清洁的锅中,加入琼脂加热溶解;水开后,加入蔗糖,搅拌均匀,将玉米粉参加剩余的水中,搅拌均匀,再沿着锅边慢慢倒入,边倒边搅拌(这样玉米粉不易结块)。持续煮5~10min,锅中的培养基成为一种糊状物时即可离火。参加丙酸(用以防腐)及酵母粉,搅拌均匀即可分装。
分装时,将造就基悬空倒进培养瓶中,尽量不要有培养基粘在瓶壁上,减少污染的可能性,每瓶培育基厚约2cm。
(4) 培养基的紫外灭菌:
等培养基凝固后,将培养基置于超净工作台中,在紫外灯下灭菌30min。
(5) 培养基的干燥:
刚配制的培养基含有较多的水份,为防止由于水份太多以致培养基太软会粘住果蝇致逝世,紫外灭菌后的培养基需在室温下干燥1~2天。
配好的培养基如暂时不用,可放在4˚C下贮存。
2、果蝇的接种与培养
(1) 果蝇的麻醉
无论是观察果蝇的性状或是选择亲蝇进行杂交时,都要先将果蝇麻醉,使之处于不运动的状况。麻醉果蝇的操作步骤如下:
1) 筹备好培养瓶、麻醉瓶及乙醚。轻拍瓶壁,让果蝇震落到培养基上。如瓶塞上附着果蝇,则稍稍晃动瓶塞,并将它们排落到培养基上。
2) 拔往麻醉瓶塞与培养瓶塞,敏捷将培养瓶口倒扣在麻醉瓶口上。轻拍培养瓶让果蝇落入麻醉瓶中(假如培养基已很稀松,则切勿倒扣,应将两瓶口横着对接,应用昆虫的趋光性,警惕地将果蝇驱进麻醉瓶)。当麻醉瓶中果蝇的数目足够时,将两瓶敏捷离开各自盖好。
3) 把麻醉瓶中的果蝇排落瓶底,拔出瓶塞,在塞子上滴几滴乙醚,重新塞入麻醉瓶。麻醉约半分钟成果蝇便不再运动,纷纭落入瓶底,麻醉即告完成,此时果蝇的翅膀是收紧的。长时光麻醉可使果蝇死亡,麻醉而死的果蝇翅膀外展,与身材垂直。
4) 将麻醉的果蝇倾倒在清洁的白色塑料板上,置于体视显微镜下用小羊毫或解剖针轻轻地拨动观察。假如在观察地进程中果蝇清醒过来,可用一培养皿罩住果蝇,再在一张滤纸条上滴一滴乙醚伸入培养皿中,形成一个临时麻醉小室再行麻醉。假如观察成果蝇不再须要,则将它们倒入盛有70%乙醇地尸体盛留器中。
(2) 接种
把麻醉的果蝇5-10只移入新的培养瓶,移入时应将瓶横卧,用羊毫将果蝇轻轻挑入,待其清醒后再将培养瓶竖起,以免果蝇粘在培养基上导致逝世亡。培养瓶外贴标签,注明名称、接种日期、接种人姓名。
(3) 培养
待果蝇清醒后将造就瓶置于25˚C造就箱中进行培育。
3、果蝇形态、生涯周期的视察
(1) 果蝇的生涯周期的察看
用体视显微镜观察培养瓶内不同生涯时代果蝇的形态、特征(卵、幼虫、蛹、成虫)。
(2) 果蝇成虫外形的观察和性别鉴定
将果蝇麻醉后倒在白塑料板上,用体视显微镜察看其外形及对雌雄性别进行鉴定。
(3) 果蝇几种突变类型的察看
视察试验室培养的几种突变类型,将视察的成果填进下表:
类型
特点
野生型
(+)
黑檀体
(e)
残翅
(vg)
三隐性
(m w sn)
体色
眼色
翅形
眼形
刚毛形态
五、作业与思考
1、通过本次试验可到达哪些目标?
2、观察比拟雌雄果蝇的差别,绘制性梳图。
3、通过观察果蝇雌雄个体的辨别,你以为哪几个特点在辨别中是重要的?
4、记下各突变型品系的特点