相差显微镜不同于普通光学显微镜,在装置上有四种必不可缺的部件:相差物镜、具有环状光阑的转盘聚光器、合轴调中望远镜和绿色的滤色镜。
(1)相差物镜(phase contrast objective)
相差物镜是显微镜特有的重要装置。在相差特镜内的后焦面上装有种类不同的相板。相板由于前述的作用,造成视场中被检样品影像与背景不同的明暗反差,各具不同的效果。因物镜内相板种类或构成的不同,物镜在明暗反差上可区分为两大类,即明反差(B)或负反差(N)物镜和暗反差(D)或正反差(P)物镜。物镜的反差类别,用英文字母B或N或D或P标志在物镜外壳上,并兼有高H(High)、中M(Medium)和低L(Low)等三种不同的反差。有的相差物镜用ph字样的标示。
同一反差类别的物镜,依放大率的不同,又可分为10×、20×、×40、和100×数种,因此,相关物镜种类颇多,一套可多达20余种。
相差物镜多为消色差物镜或平场消色差物镜(PL)。
(2)转盘聚光器(turret condenser)
位于镜台之下,普通聚光器的所在位置上,由聚光镜和环状光阑(annular diapheragm)构成。环状光阑位于聚光镜之下,是一种特殊的光阑装置,由大小不同的环状通光孔构成,不同规格的通光孔——环状光阑装配在一个可旋转的转盘上,按需要调转使用(图1-5)。环状光阑的环宽与直径各不相同,与不同放大率的相差物镜内的相板相匹配,不可滥用。转盘前端朝向使用者一面有标示窗(孔),转盘上的不同部位标有0、1、2、3和4或0、10、20、40和100字样,通过标示窗显现。“0”表示非相差的明视场的普通光
阑。1或10、2
或20、3或40和4或100,表示与相应放大率的相差物镜相匹配的不同规格的环状光阑的标志。通过手动转入的标示窗内之数字,表示该数字所代表的环状光阑已进入光路。
(3)合轴调中望远镜(centering telescope)
合轴调中望远镜简称CT,又名合轴调中目镜。它是眼透镜,可行升降调节,具有较长的焦距的一种望远目镜。镜筒较长,其直径与观察目镜相同。它的功用仅作为环状光阑的环孔(亮环)与相差物镜相板的共轭面环孔(暗环)的调中合轴与调焦之用。相差显微镜使用时,转盘聚光器的环状光阑与相差目镜必须匹配,且环状光阑的孔环与相差物镜相板共轭面的环孔在光路中要准确合轴,并完全吻合或重叠。以保证直射光和衍射光各行其路,使成像光线的相位差转变为可见的振幅差。但是,镜体的光路中前述两环的影像较小,一般目镜难以辨清,不能进行调焦与合轴的操作,非借助合轴调中望远镜不可。
(4)绿色滤色镜(green filter)
相差物镜的种类,从色差消除情况来分,多属消色差物镜(achromatic objective)或PL物镜。消色差物镜的Zui佳清清晰范围的光谱区为510~630nm。欲提高相差显微镜的性能Zui好以波长范围小的单色光照明,即接物镜Zui佳清晰范围的波长的光线进行照明。所以,使用相差物镜时,在光路上加用透射光线波长为500~600nm左右的绿色滤色镜,使照明光线中的红光和蓝光被吸收,只透过绿光,可提高物镜的分辨能力。该滤色镜兼有吸热的作用,以利活体观察。