尼康显微镜紫外激发块组的介绍
包括在尼康显微镜紫外线激发荧光滤波器图集四个包含任一的带通或长通发射（阻挡）能够通过任一窄或宽的蓝色，绿色和红色的可见光波长区域中，选择性分离荧光发射滤光片小心平衡组合。这些过滤器的组合包括330和380纳米的带10的通带宽度分布，40，和50毫微米之间的激发波长范围内。三组合的采用相同的二色镜，而第四组具有较低的波长切于一个反射镜，用它的较窄的激发带重合。紫外线过滤套包含任长通或带通单发射滤光片。
紫外线过滤器集的性能可以通过从与每个个体滤光片组合的捕获的同一视场的图像进行比较来判断，如图1所示的检体是从小鼠肾脏获得的并用薄的冷冻切片的组织切片（16微米）三种荧光团的组合。肾小球的薄款元素和曲小管被标记的Alexa Fluor488（绿色发光），麦胚凝集素。丝状肌动蛋白居住在肾小球和刷状缘染色的Alexa Fluor568（红色发射）鬼笔环肽，而在细胞核中的DNA counterstained用DAPI（蓝色发光），从而完善了标识制度。
在尼康紫外线激发一系列的孤带通滤波器的发射，在UV-2E/ C，产生在漆黑的背景，深蓝色的彩色图像（图1（a）），并非常适用于多色荧光成像使用与其他激发块组合。在UV-2E/ C组合的带通发射滤波器消除了荧光，从红色和绿色的荧光团在样品标记有多个探针。在UV-1A滤波器组合（图1（b））中包含一个很窄的激发带（10纳米），其与由普通电弧放电灯所产生的汞i线（365纳米）的波长一致。该过滤器组合的目的是通过一个窄带通激发区域尽量减少自体荧光，同时通过了所有的发射波长超过420纳米。在UV-1A滤波器组中的二色镜具有Zui短的截止波长（380纳米）的紫外线系列。
通常被称为标准的紫外组中，UV-2A组合配有50纳米的带通滤波器激励覆盖Zui长波长紫外区域的。 耦合到一个400纳米的截止二色镜和一个长通发射滤波器中，UV-2A产生的任何过滤器组合的Zui亮的图象在Nikon紫外线集（图1（c））。 在UV-2B是在配置文件中的UV-2A相似，但配备有一个较长的切口上波长（红移由15纳米）的屏障过滤器，以减少背景荧光。 时相比，UV-2A（图1（c）和图1（d）），在UV-2B产生暗得多的背景与优越的整体图像的对比度。 规格从各种尼康紫外滤光片组合的二色性反射镜和过滤器都列在表1中。
尼康紫外线过滤组合规格
滤镜套装 描述 | 激发滤光片（nm） | 双色镜 (nm) | 屏障过滤 (nm) | 备注 |
UV-1A | 365/10 | 380 (LP) | 420 (LP) | Narrow Excitation Band |
UV-2A | 355/50 | 400 (LP) | 420 (LP) | Standard UV Cube |
UV-2B | 355/50 | 400 (LP) | 435 (LP) | Darker Background |
UV-2E/C | 360/40 | 400 (LP) | 460/50 | Medium Excitation Band |
表1
UV-2E/C - 在UV-2E/ C滤波器组合设计为紫外荧光锐截止滤波器模块。过滤器是软涂敷型旨在产生高信/噪比。在这种组合中使用的窄带通阻挡滤波器被设计为显着地减少或完全消除绿色和红色可见光的波长。
UV-1A - UV-1A组合被设计为紫外荧光具有窄的激发带通（仅第 i -line汞光谱的利用）和窄的二色镜的通带，其Zui小化的自体荧光和光漂白滤波器块。
UV-2A -在 UV-2A滤波器组合设计为紫外荧光标准的过滤块，是Zui亮的紫外线过滤器尼康调色板设置。
UV-2B - UV-2B的组合被设计成用于紫外荧光，提供了一个更暗的背景和比UV-2A滤波器组合更好的对比度的通用滤波器块。
荧光团的宽阵列已经开发出用激发波长范围从紫外区域的调查。 Catalogued表2是一些Zui流行的染料和荧光探针可以与尼康紫外线过滤器的组合来可视化的。 本地化的环境显著影响荧光团的吸收光谱和发射光谱的Zui大值（峰值）波长的光，因此在表2中给出的值可能与实验条件而变化。 此列表仅旨在作为滤波器和荧光基团的选择的引导，而不应被认为是详尽的或穷尽的汇编。 许多包含在表2中的荧光探针是专有的，已经开发了以Zui小化，同时确保了荧光染料的吸收和发射光谱以及普通荧光滤光器的组合之间的Zui大程度的重叠光漂白。 注意，由于宽的吸收和发射带，数在表2中列出的荧光探针也适合于与具有紫色和蓝紫色激发带通区域的过滤器组合使用。
荧光紫外激发光谱曲线
荧光染料 | 激发波长（纳米） | 发射波长 (纳米) | 推荐的滤波器组合(s) |
Acridine Blue | 362 | 462 | UV-2A, UV-2B |
AFA (Acriflavin Feulgen SITSA) | 355-425 | 460 | UV-2A, UV-2B |
Alexa Fluor 350 | 346 | 442 | UV-2A, UV-2B |
Alexa Fluor 405 | 401 | 421 | UV-2A, UV-2B |
AMCA (Aminomethylcoumarin Acetic Acid) | 345 | 445 | UV-2A, UV-2B |
AMCA-X (AMCA Succinimidyl Ester) | 353 | 442 | All |
Aminoquinoline | 355 | 550 | UV-1A, UV-2A |
Aniline Blue | 370 | 509 | UV-1A, UV-2A |
ANS (Anilinonaphthalene Sulfonic Acid) | 372 | 455 | All |
Anthroyl Stearate | 371 | 446 | All |
BAO 9 (Bisaminophenyloxadiazole) | 365 | 395 | UV-1A, UV-2A |
BFP (Blue Fluorescent Protein) | 380 | 440 | All |
Bisbenzamide | 360 | 605 | UV-2A, UV-2B |
Blancophor SV | 370 | 435 | All |
Blue FluoSpheres | 350 | 440 | All |
Blue FluoSpheres (Short Wavelength) | 365 | 415 | UV-1A, UV-2A |
Calcein Blue | 370-375 | 420-435 | All |
Calcofluor RW | 370 | 440 | All |
Calcofluor White (Standard Solution) | 365 | 435 | All |
Cascade Blue | 370 | 425 | UV-1A, UV-2A |
Cascade Yellow | 402 | 545 | UV-1A, UV-2A |
CCF2 (GeneBLAzer) | 402 | 520 | UV-1A, UV-2A |
CellTracker Blue Dyes | 354-372 | 466-470 | All |
CPM Probes (Maleimide Coumarins) | 375-385 | 460-475 | All |
DANS (Dimethylaminonaphthalene) | 340 | 525 | UV-2A, UV-2B |
DANSA (Diamidinonaphthyl Sulfonic Acid) | 360 | 430 | UV-1A, UV-2A |
Dansyl Probes | 335-380 | 475-575 | All |
DAPI (Diamidinophenylindole) | 358 | 461 | All |
Dapoxyl Probes | 375-400 | 575-600 | UV-1A, UV-2A |
DIDS (Diisothiocyanatostilbene Disulfonic Acid) | 341 | 415 | UV-1A, UV-2A |
Dimethylamino Sulfonic Acid | 340 | 520 | UV-2A, UV-2B |
DIPI (Bisimidazolinylphenylindole) | 364 | 455 | UV-2A, UV-2B |
Dopamine | 340 | 490-520 | UV-2A, UV-2B |
DPH (Diphenylhexatriene) | 350 | 452 | UV-2A, UV-2B |
ELF-97 Alcohol | 345 | 530 | UV-2A, UV-2B |
EBFP (Enhanced Blue FP) | 380 | 440 | All |
ERTracker Blue/White DPX | 374 | 575 | UV-2A, UV-2B |
Fast Blue | 360 | 410 | UV-1A, UV-2A |
Flazo Orange | 375-530 | 612 | UV-1A, UV-2A |
Fluorescamine | 390 | 460-475 | UV-2A, UV-2B |
FluoroGold (Hydroxystilbamidine) | 365 (High pH) | 565 (High pH) | All |
Fura-2 | 335 (High Ca) | 505 (High Ca) | UV-2A, UV-2B |
GFP (Blue Shifted, Y66H) | 382 | 448 | UV-2A, UV-2B |
GFP (Wild Type) | 395 | 508 | UV-1A, UV-2A |
Gloxalic Acid | 405 | 460 | UV-2A, UV-2B |
Granular Blue | 355 | 425 | UV-1A, UV-2A |
Hoechst 33258 | 346 | 460 | All |
Hoechst 33342 | 347 | 483 | All |
Hoechst 34580 | 392 | 440 | All |
HPTS (Hydroxypyrene Trisulfonic Acid) | 355 | 465 | All |
Hydroxymethylcoumarin | 360 | 455 | All |
HAT (Hydroxytryptamine) | 370-415 | 520-540 | All |
IAEDANS | 336 | 482 | UV-2A, UV-2B |
Indo-1 | 330 (High Ca) | 405 (High Ca) | All |
Intrawhite CF | 360 | 430 | UV-1A, UV-2A |
Laurdan | 364 | 497 | All |
Leucophors | 370-395 | 430-465 | All |
LysoSensor Blue | 373 | 425 | UV-1A, UV-2A |
LysoSensor Yellow/Blue | 329 (High pH) | 440 (High pH) | UV-1A, UV-2A |
LysoTracker Blue | 373 | 422 | UV-1A, UV-2A |
MAG Probes (Magnesium Indicators) | 330-350 | 420-505 | UV-2A, UV-2B |
Marina Blue | 365 | 460 | All |
Methoxycoumarins | 340-365 | 400-470 | All |
Monochlorobimane | 380 | 461 | UV-2A, UV-2B |
MPS (Methyl Green Pyronine Stilbene) | 364 | 395 | UV-1A, UV-2A |
Noradrenaline | 340 | 505 | UV-2A, UV-2B |
Nuclear Fast Red | 289-530 | 580 | UV-1A, UV-2A |
Nuclear Yellow | 365 | 495 | UV-1A, UV-2A |
OPT (o-Phthalaldehyde) | 340 | 455 | UV-2A, UV-2B |
PBFI (Potassium Probe) | 334 (High K) | 525 (High K) | UV-2A, UV-2B |
Phorwites | 360-380 | 430 | All |
PMIA (Pyrenemethyl Iodoacetate) | 341 | 376 | UV-1A |
Prodan | 361 | 498 | All |
Pyrene | 345 | 378 | UV-1A |
Pyrozal Brilliant Flavin 7GF | 365 | 495 | UV-1A, UV-2A |
QDots 525-655 | 350-450 | 525-655 | UV-2A, UV-2B |
Quin-2 (Calcium Probe) | 332 (High Ca) | 492 (High Ca) | UV-2A, UV-2B |
SBFI (Sodium Probe) | 334 (High Na) | 525 (High Na) | UV-2A, UV-2B |
Serotonin | 365 | 530 | UV-2A, UV-2B |
SITS (Stilbene Isothiosulphonic Acid) | 337 | 436 | UV-2A, UV-2B |
SPQ (Methoxysulfopropylquinolinium) | 344 | 443 | UV-2A, UV-2B |
Stilbene | 335 | 440 | UV-2A, UV-2B |
Tetracycline | 390 | 560 | UV-2A, UV-2B |
Thioflavin TCN | 350 | 460 | UV-2A, UV-2B |
Thiolyte | 380 | 480 | All |
Tinopol CBS | 390 | 430 | UV-2A, UV-2B |
True Blue | 365 | 425 | UV-1A, UV-2A |
Uvitex SFC | 365 | 435 | All |
表2
虽然如上所述充分的多数用紫外线波长的调查服务的四个过滤器的组合，若干附加的特殊过滤器组可从厂家售后。 激发在250和300纳米之间的波长区域的荧光团可使用过滤器的组合，包括集中在这个区域的带通滤波器的激励。 这些组合还需要二色镜和屏障过滤器与切口对在紫外区域的波长（以及检测器对紫外线敏感）。 设计用于氙弧放电灯激励滤波器组包含集中在300到400纳米的区域宽的带通激发滤光片（约100纳米）。
其他专门的过滤器组包含发射滤波器具有两个带通区域为离子敏感的探针，如Indo-1, FluoroGold, Fura-2，和LysoSensor染料的比率的分析。其他套结合的窄水银i线（365纳米）的带通滤波器的激发带的带通发射滤波器专门用于染料如DAPI, Hoechst 33258量身定做（通过合并的UV-2E/ C和UV-1A组合的元素。生产），和AMCA。此外，已经开发了用于特定荧光团的滤波器的组合。间设计的芘这些组合，ELF-97，核固红，SPQ，瀑布蓝和金探针。有长通滤波器截止波长上的黄色光谱区域过滤器集是用于检查残留的光致抗蚀剂在半导体晶片上是有用的。